（一）调整与超速离心法

（1）将标记的大于10nm的胶体金溶液选用15000r/min 4^℃离心15min，吸出上清，弃去沉淀，以去除大的聚合物。

（2）一般在10nm以上所标记的胶体金均可在调整离心机上离心，小于10nm颗粒的胶体金用超速离心机离心，在4^℃离心1h左右，弃上清，将沉淀以原体积的0.02mol./l TBSpH8.2（内含1%BSA，0.05%叠氮钠）溶解，重复离心2～3次，沉淀溶于原体积的1/10TBS中。4℃保存备用。为了得到颗粒均匀一致的免疫金试剂，上述粗提制剂可用10%～30%蔗糖或甘油溶液作密度梯度离心，分带收集不同大小颗粒的胶体金标记蛋白制剂。

几种免疫金探针离心所用转速（见表5-6），离心纯化时所用转速见表5-7，胶体金的OD值见表5-8。

表5-6 几种免疫金探针离心时所用转速参考表

胶体金颗粒直径（nm）	蛋白质	时间（min）	转速（r）
3.0	GAR IgG	60	30000
5.0	GAR IgG	50	25000
10.0	RAM IgG	50	19000
15.0	SPA	40	17000
15.0	ALcc IgG	40	17000
20.0	SPA	40	13000
25.0	SPA	35	12000

说明：GAR IgG=羊抗兔IgG；RAm IgG=兔抗鼠IgG；ALcc IgG=抗肝细胞癌IgG; SPA=葡萄球菌A蛋白

表5-7 几种免疫金探针离心纯化时所用转速

胶体金颗粒（nm）	pH	蛋白质	转速（xg）	时间（min）
5	9.0	羊抗人IgG	45000	45
10	8.2	抗胃癌单克隆抗体	45000	30
15	6.5	链霉亲和素	12000	45
20	6.0	SPA	12000	30

将纯化好的胶体金用0.02mol/l TBS缓冲液作1：20稀释，用520nm测OD值。

表5-8 不同大小胶体金的OD值

胶体金颗粒大小（nm）	OD（520）nm
5	2.5
10	2.5
15	3.5
20	5.0