一、亮度法
1.原理 血清中游离脂肪酸经抽提到高密度铜试剂中,形成铜皂在上层溶剂中,再用二苯卡巴肼与铜显色,进行定量。 2.试剂组成 | 代号 | 种类 | 浓度 | 组成 | 贮存2~8℃ | 有效期 | | R-1 | 抽提剂 | | 氯仿:庚烷:甲醇=5:5:1(V/V) | | | | R-2 | 缓冲液 | 33mmol/L | KH2PO44.539g/L 100ml+Na2HPO4·2H2O5.983g/l 50ml调pH至6.4 | | | | R-3 | 铜贮液 | 500mmol/L | Cu(NO3)2·3H2o 12.07g加H2O→100ml | | | | R-4 | 三乙醇胺 | 1.0mol/L | 三乙醇胺10ml,加水→100ml | | | | R-5 | NaOH液 | 1mol/L | | | | | R-6 | 铜试剂 | | R-3 10ml+R-4 10ml+R-6 6ml +H2O→100ml调pH至8.1 | | | | R-7 | 二苯卡 巴肼液 | | 二苯卡巴肼(乙醇)液(4g/L)10ml+R-4 0.1ml | | 临用前配制 | | R-8 | 软脂酸标准贮存液 | 2mmol/L | 软脂酸51.2mg溶于100ml R-1液 | 冷藏 | | | R-9 | R-8的应用液 | 500μmol/L | 用R-1液稀释 | 冷藏 | |
3.操作 按图15-7操作。 4.计算 血清游离脂肪酸(μmol/L)=ESA/EST×500
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